Сравнительный анализ липидного состава перитонеальной жидкости и плазмы крови у пациенток с наружным генитальным эндометриозом и миомой матки

Цель исследования. Повышение эффективности диагностики наружного генитального эндометриоза методом прямой масс-спектрометрии.
Материал и методы. В исследовании по типу случай-контроль участвовали 100 пациенток с наружным генитальным эндометриозом и 50 пациенток контрольной группы с миомой матки, подвергшихся оперативному лечению в гинекологическом отделении ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова МЗ РФ. Наружный генитальный эндометриоз был диагностирован на основании лечебно-диагностической лапароскопии и окончательно подтвержден гистологически. У всех участниц исследования производился забор крови и перитонеальной жидкости для определения их липидного состава. Качественную и количественную оценку липидома проводили с помощью масс-спектрометрии с электрораспылением. В результате анализа было выявлено более 140 молекулярных признаков, большую часть которых составляли липиды пяти классов: фосфатидилхолины, фосфатидилэтаноламины, сфингомиелины, ди- и триглицериды. Полученные экспериментальные данные были проанализированы с помощью многофакторного метода PLS-DA. Созданные статистические модели хорошо группируют данные по признаку случай-контроль и позволили выявить липиды, дающие наибольший вклад в кластеризацию данных.
Результаты. Выявлено значительное снижение уровня четырех липидов в крови и перитонеальной жидкости больных эндометриозом, в отличие от пациенток группы сравнения, а именно: фосфатидилхолина PC 36:4, лизофосфатидилхолина LPC 16:0, сфингомиелина SM 34:1, фосфаэтаноламина PE O-34:1. Уровень фосфаэтаноламина PE O-20:0 оказался повышенным не только в эндометриоидных тканях, но и в биологических жидкостях больных эндометриозом, что свидетельствует о возможной диагностической ценности данного липида. Чувствительность метода для плазмы крови составила 93%, специфичность – 95%; для перитонеальной жидкости чувствительность – 90%, специфичность – 95%.
Заключение. Данное исследование подтверждает участие фосфолипидов и сфинголипидов в патофизиологии эндометриоза, а также открывает новые возможности для неинвазивной диагностики наружного генитального эндометриоза.

Эндометриоз занимает ведущее место среди пролиферативных заболеваний органов малого таза [1].

Около 10% женщин репродуктивного возраста страдают эндометриозом, что составляет 176 млн женщин во всем мире, к тому же эндометриоз выявляется у 30–50% женщин с бесплодием и/или хронической тазовой болью [2].

Эндометриоз – процесс, при котором за пределами полости матки происходит доброкачественное разрастание ткани, по морфологическим и функциональным свойствам подобной эндометрию [3].

В основе патофизиологии заболевания лежит воспалительный процесс, вызванный распространением эндометриальных клеток за пределы слизистой оболочки матки, а также изменения в других физиологических процессах, в том числе повышение клеточной адгезии, пролиферации, инвазии и ангиогенеза, деградация внеклеточного матрикса, нарушение апоптоза, увеличение окислительного стресса, повышение биосинтеза стероидных гормонов [4, 5]. Считается, что в результате данных патофизиологических процессов клетки эндометрия могут выживать и размножаться в эктопических участках [5].

«Золотым» стандартом диагностики наружного генитального эндометриоза (НГЭ) является лапароскопия с последующим гистологическим исследованием удаленных биоптатов [6]. Это связано с тем, что консервативные методы постановки диагноза эндометриоза имеют ограничения, например, для гинекологического осмотра характерно слабое прогнозирующее значение, а визуализационные технологии не позволяют выявить поверхностный перитонеальный эндометриоз [1, 6]. В среднем задержка в постановке диагноза НГЭ составляет 7–11 лет после появления первых клинических симптомов заболевания [4]. В соответствии с консенсусом Всемирного общества по эндометриозу (World Endometriosis Society), создание надежной неинвазивной диагностики НГЭ является одной из приоритетных задач научных исследований в области гинекологии [7].

Несмотря на то, что было предложено более 100 потенциальных биомаркеров эндометриоза, ни один из них не показал диагностической значимости и возможности клинического применения [5, 7].

Недавно группой наших исследователей было проведено метаболомное исследование эндометриоидных тканей различной локализации [8]. Как выяснилось, в эктопическом эндометрии, в отличие от эутопического, уровень липидов 5 различных классов оказался достоверно различным: фосфатидилхолинов (PC 32:1, PC O-36:3, PC 38:7, PC 38:6, PC 40:8, PC 40:7, PC 40:6, PC O-42:1), фосфоэтаноламина (PE O-20:0), сфингомиелина (SM 34:1), диглицерида (DG 44:9) и триглицеридов (TG 41:2, TG 49:4, TG 52:3) [8]. Фосфатидилхолины и сфингомиелин могут быть потенциальными маркерами эндометриоидного процесса, поскольку эти липиды тесно связаны с подавлением апоптоза, окислительным стрессом и малигнизацией клеток [9]. Данные результаты подтверждаются исследованиями иностранных коллег, так Dutta и соавт. [10] также выявили увеличение концентрации фосфатидилхолинов в образцах сыворотки у пациентов с эндометриозом. Кроме того, участие сфинголипидов в патофизиологии эндометриоза было продемонстрировано в работе Lee с соавт. [11], которые выявили изменения метаболизма сфинголипидов в эндометриоидных тканях, сыворотке крови и перитонеальной жидкости больных НГЭ.

В настоящем исследовании был проведен анализ содержания липидов в перитонеальной жидкости и плазме крови больных эндометриозом. Перитонеальная жидкость при эндометриозе имеет свои особенности вследствие непосредственного контакта с очагами и является перспективной биологической средой для поиска различных биомаркеров. Привлекательность использования плазмы крови для диагностики различных заболеваний человека обусловлена главным образом тем обстоятельством, что она наиболее полно отражает фенотип организма и его состояние в конкретный момент времени.

В данном исследовании проанализирован ряд метаболитов, выявленных в эктопическом эндометрии. Рассмотрена их роль в патофизиологии эндометриоза и возможность создания диагностической модели, включающей комбинацию найденных липидов.

Цель данной работы – повышение эффективности диагностики НГЭ методом масс-спектро­метрии.

Материал и методы исследования

В исследование включены 100 пациенток с НГЭ и 50 пациенток контрольной группы с миомой матки, которые были обследованы и прооперированы в ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова МЗ РФ. Включение пациенток в клиническое исследование проводилось после получения информированного согласия и протоколировалось по стандартам Этического комитета Российской Федерации.

Критериями включения были: фертильный возраст женщины, гистологически подтвержденный диагноз НГЭ. Для женщин группы сравнения критериями включения были: фертильный возраст пациенток и отсутствие НГЭ по данным лапароскопии.

Критерии исключения были общими для обеих групп: прием гормональных препаратов в течение 6 месяцев до операции, воспалительные заболевания органов малого таза, наличие инфекций передающихся половым путем, сопутствующих гинекологических заболеваний, тяжелой соматической, онколо...

Борисова А.В., Чаговец В.В., Козаченко А.В., Стародубцева Н.Л., Кононихин А.С., Салимова Д.Ф., Коган Е.А., Адамян Л.В., Франкевич В.Е., Сухих Г.Т.