Акушерство и Гинекология №9 / 2013
Сравнительный анализ применения масс-спектрометрии и автоматизированной проточной цитометрии для скрининга бактериурии
ФГБУ Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России; ФГУ Научно-исследовательский институт физико-химической медицины ФМБА России, Москва
Цель исследования. Определение эффективности современных методов диагностики бактериурии (масс-спектрометрии, проточной цитофлюориметрии) путем параллельного сравнительного исследования и выбор наиболее оптимального способа диагностики инфекции мочевыводящих путей (ИМП).
Материал и методы. Проведен комплексный анализ 790 образцов мочи тремя методами: флуоресцентной проточной цитофлюориметрией, MALDI-TOF масс-cпектрометрией и культуральным методом.
Результаты исследования. По результатам исследования образцов мочи тремя методами в 65,6% получены идентичные результаты, в 34,4% имелись расхождения.
Заключение. Культуральное исследование мочи остается «золотым стандартом» в диагностике ИМП. При истинной бактериурии MALDI-TOF масс-спектрометрия позволяет быстро идентифицировать напрямую в моче микроорганизмы в высоких титрах, что сокращает время до начала этиотропной терапии. По анализу мочи на проточном цитофлуориметре можно определить наличие бактериурии при концентрации бактерий >105 КОЕ/мл, либо ее отсутствие при отрицательном результате и отсутствии лейкоцитов.
Инфекции мочевыводящих путей (ИМП) – термин, охватывающий инфекционно-воспалительные заболевания любого органа мочевыводящей системы, при которых имеется микробная колонизация мочи (бактериурия). Современная классификация Европейской ассоциации урологов (EAU, 2000) подразделяет ИМП на неосложненные и осложненные и, как правило, наиболее часто в практике встречаются неосложненные ИМП [1, 2].
ИМП нередко осложняют течение беременности, причем риск развития ИМП у беременных женщин значительно выше, чем у небеременных. В структуре ИМП беременных помимо острого цистита и пиелонефрита выделяют бессимптомную бактериурию, которая при отсутствии адекватной терапии в 30% случаев может переходить в симптоматические ИМП [3].
Традиционно степень бактериурии в диагностике ИМП определяется на основании оценки концентрации бактерий, что позволяет дифференцировать истинную бактериурию от контаминации. Однако все же имеются некоторые разногласия, касающиеся определения ИМП и ее диагностики, и до сих пор противоречивыми остаются мнения по поводу значимости низкой и бессимптомной бактериурии в развитии ИМП [4].
По одним данным, диагностический титр первичных возбудителей ИМП (E. coli), обнаруженных в собранной при естественном мочеиспускании пробе мочи, должен быть не менее 103 КОЕ/мл, а по другим – ≥104 КОЕ/мл для женщин и ≥103 КОЕ/мл для мужчин. Некоторые авторы считают, что при наличии характерных для цистита симптомов и обнаружении при культуральном исследовании средней порции утренней мочи микроорганизмов в 102–104 КОЕ/мл бактериурия должна считаться клинически значимой и являться показанием к антибактериальной терапии [1–3, 5, 6]. В современных клинических руководствах в качестве диагностического критерия рекомендуется ввести понятие low-cоunt bacteriuria (бактериурия низкой степени), то есть 103–105 КОЕ/мл. При этом необходимо учитывать наличие клинических симптомов у пациента, способ получения пробы мочи и метод определения титра бактерий, а также их патогенные свойства [7–9].
Для выявления бактериурии, наряду с микроскопией осадка мочи, применяют различные методы быстрой диагностики, так называемые скрининг-тесты: тест восстановления трифенилтетразолия хлорида (ТТХ-тест), тест на определение эстеразы лейкоцитов, dipstick test и др. Следует отметить , что чувствительность скрининг-тестов для диагностики бактериурии невысокая, поэтому подтверждать их необходимо культуральным исследованием. Посев мочи на сегодняшний день считается «золотым стандартом», так как является наиболее информативным способом диагностики бактериурии, позволяющим определить количественную характеристику этиологического агента. Однако на выполнение данного исследования требуется от 36 до 72 часов, а учитывая, что почти в 70% случаев при посеве мочи мы получаем отрицательный результат, столь дорогостоящее исследование может оказаться необоснованным [1, 10, 11].
С начала XXI столетия в бактериологических лабораториях Европы и России для диагностики бактериурии стали использовать сразу два принципиально новых метода быстрого выявления и идентификации бактерий в моче – проточную цитофлюометрию и времяпролетную масс-спектрометрию [11–15].
Проточная цитофлюометрия – технология полупроводникового диодного лазера, позволяющая идентифицировать и подсчитывать флюоресцентно-меченные частицы в жидких средах. На этом принципе работает автоматический анализатор осадка мочи UF-500i (1000i) (Sysmex corp., Япония) и определяет такие показатели, как эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки, цилиндры, кристаллы, бактерии с приблизительным разделением на грамотрицательные, грамположительные и грибы.
Масс-спектрометрия (MS) – аналитический метод измерения массы заряженных частиц (атомов, молекул) анализируемого вещества по их поведению в электрических и/или магнитных полях (молекулярные весы). Масс-спектрометр – это инструмент, способный определять массы неорганических и органических молекул, в том числе белков, нуклеиновых кислот, липидов, являющихся компонентами животных и бактериальных клеток.
Таким образом, целью нашего исследования стало определение эффективности современных методов диагностики бактериурии (масс-спектрометрии, проточной цитофлюориметрии) путем параллельного ...
