Акушерство и Гинекология №5 / 2017
Сравнительный анализ транскриптов клеток кумулюса при использовании различных триггеров овуляции в программах вспомогательных репродуктивных технологий
1ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова Минздрава, Москва, России
2ИПО ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России
В настоящее время большинство циклов лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) проводятся с применением контролируемой стимуляции суперовуляции. Наиболее распространенным в клинической практике протоколом стимуляции яичников является протокол с антагонистами гонадотропин-рилизинг-гормона (ант-ГнРГ). Использование ант-ГнРГ подавляет на определенное время синтез эндогенного лютеинизирующего гормона (ЛГ), что позволяет управлять индуцированным менструальным циклом, предотвращая преждевременную лютеинизацию и делая возможным назначение триггера овуляции для получения зрелых ооцитов.
В естественном цикле пик ЛГ инициирует процесс овуляции и разрыв преовуляторного фолликула. На уровне клеток гранулезы пик ЛГ индуцирует разрыв межклеточных соединений между клетками гранулезы и отделение кумулюс-ооцитного комплекса (КОК), завершение мейотического деления и переход ооцита в фазу зрелости, а также лютеинизацию клеток гранулезы [1].
В течение длительного времени для индукции овуляции в циклах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) использовали введение человеческого хорионического гонадотропина (чХГ) – препарата, обладающего способностью связываться с рецепторами ЛГ и замещать его функцию. В 1974 году было показано, что ЛГ и чХГ имеют сходную структуру: идентичность α-субъединицы чХГ с α-субъединицей ЛГ, а также схожесть 85% их β-субъединиц позволяет чХГ связываться с ЛГ-рецептором и активировать его. Тем не менее, данные молекулы не являются абсолютными аналогами по строению и функции, так как чХГ имеет несколько большую по размерам молекулу, гораздо сильнее связывается с рецептором ЛГ и имеет более длительный период полувыведения.
Применение в качестве триггера овуляции препарата агониста гонадотропин рилизинг-гормона (а-ГнРГ) основано на способности данной молекулы замещать ГнРГ на его рецепторах, вызывая кратковременный пик эндогенного ЛГ, достаточный для овуляции.
Предполагается, что использование различных триггеров овуляции не оказывает влияние на качество получаемых в цикле ВРТ ооцитов и эмбрионов [2, 3]. В то же время возможное негативное влияние а-ГнРГ на исходы ВРТ реализуется за счет изменений в течении лютеиновой фазы, которые не могут быть компенсированы путем применения заместительной гормональной терапии [4, 5].
Более детальное изучение данной проблемы показало, что применение различных препаратов в качестве триггера овуляции приводит к различиям в эндокринном статусе периовуляторного периода. Анализ использования а-ГнРГ и чХГ для индукции овуляции показал значимые различия уровней стероидных гормонов и гонадотропинов в фолликулярной жидкости [6].
Кроме того, содержание в фолликулярной жидкости некоторых регуляторных факторов и факторов роста также различалось при использовании протоколов с различными триггерами овуляции [7, 8].
Следует учитывать, что содержание различных биологических веществ в фолликулярной жидкости может не полностью отражать биологические процессы, протекающие в КОК. Клетки кумулюса в процессе фолликулогенеза находятся в метаболическом симбиозе с развивающимся ооцитом, что делает их привлекательным субъектом для проведения исследований по сравнению с фолликулярной жидкостью. Так было показано, что профиль экспрессии генов стероидогенеза различается при использовании для индукции овуляции а-ГнРГ и чХГ [9].
Согласно полученным данным ряда исследователей, транскрипционный профиль клеток кумулюса может быть использован для прогнозирования качества эмбрионов и исходов программ ВРТ [10, 11].
Тем не менее, ни в одном из вышеперечисленных исследований не оценивали влияние а-ГнРГ и чХГ в качестве триггера овуляции на профиль экспрессии генов в клетках кумулюса.
Целью данной работы было изучение транскрипционного профиля (транскриптов) клеток кумулюса при использовании а-ГнРГ и чХГ в качестве триггера овуляции, а также возможности использования такого профиля в прогнозировании потенциала развития эмбрионов in vitro в программах ВРТ.
Материал и методы исследования
Данное исследование проводилось в период с 2014 по 2016 гг. на базе кафедры акушерства, гинекологии, перинатологии и репродуктологии ИПО Первого МГМУ им. И.М. Сеченова в условиях 1-го гинекологического отделения ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Исследование было одобрено комиссией по этике биомедицинских исследований при ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России.
В исследование были включены 35 пациентов с нормальным ответом яичников. Критериями включения были: возраст пациенток от 22 до 38 лет, регулярный менструальный цикл (25–34 дней), индекс массы тела 18–29 кг/м2, уровень ФСГ≤10 МЕ/л, менее 3 неудачных предыдущих попыток ЭКО. Всем пациентам проводили стимуляцию яичников с рекомбинантным фолликулостимулирующим гормоном (ФСГ) (гонал-ф, Serono Merck, Швейцария; или пурегон, Organon, Нидерланды) и/или очищенным человеческим менопаузальным гонадотроп...
