Стандарты качества при создании реагентов для ПЦР-диагностики гепатитов В и С in vitro

Обзор посвящен сравнению стандартов качества при разработке и производстве реагентов для ПЦР-диагностики гепатитов В и С в России и Европейском союзе, основным требованиям к таким реагентам, в том числе специализированным для ПЦР-диагностики, а также ключевым понятиям клинической диагностики с помощью ПЦР.

Сегодня в области диагностики гепатитов В и С in vitro существует большое разнообразие наборов реагентов для качественного и количественного определения вируса. В номенклатурной классификации медицинских изделий (МИ) с последними изменениями, утвержденными Приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 25 сентября 2014 г. № 557н, МИ для диагностики in vitro делятся на [1, 2]:

1. Анализаторы для диагностики in vitro.
2. Емкости/контейнеры для проб для диагностики in vitro.
3. Программное обеспечение для диагностики in vitro.
4. Реагенты/наборы для определения аналитов для диагностики in vitro.
5. Реагенты/оборудование/расходные материалы общелабораторные для диагностики in vitro.
6. Среды питательные для диагностики in vitro.

Данный обзор посвящен различным требованиям и регламентам, принятым в Российской Федерации и за рубежом, в основном п. 4 вышеуказанного списка, и в первую очередь реагентам/наборам для диагностики вирусов гепатитов В (ВГВ) и С (ВГС) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени.

В нашей стране регламентирующими документами, посвященными разработке и регистрации МИ, следовательно, актуальными и для ПЦР-диагностики in vitro, являются: постановления Правительства Российской Федерации [3, 4], приказы Минздрава России [1, 2, 5], ГОСТы [6–10]; в ЕС: Directive 98/79/EC of the European Parliament and of the Council of 27 October 1998 on in vitro diagnostic medical devices. [11], European Pharmacopoeia [12], CTS IVD – Common technical specifications for in vitro diagnostic medical devices [13].

Часть ГОСТов РФ представляют собой адаптивные переводы соответствующих европейских или международных стандартов и вместе с постановлениями Правительства и приказами Минздрава России являются общими документами для всех МИ для диагностики in vitro. В то же время упомянутые документы ЕС содержат разделы, посвященные специально МИ на основе методов амплификации нуклеиновых кислот. Эти методы обладают рядом особенностей, о которых речь пойдет далее. Среди российских ГОСТов, относящихся именно к ПЦР-диагностике, сейчас действует несколько документов, стандартизирующих тестирование пищевых продуктов и кормов для животных, а также лекарственных средств для ветеринарии [14–18]:

• ГОСТ Р 52833-2007 «Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения»;
• ГОСТ ISO 22119-2013 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени для определения патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах. Общие требования и определения»;
• ГОСТ ISO 22118-2013 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения и количественного учета патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах. Технические характеристики»;
• ГОСТ ISO 20837-2013 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах. Требования к подготовке образцов для качественного обнаружения»;
• ГОСТ Р 56140-2014 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Выявление ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)» (дата введения – 01.01.2016).

Для ПЦР-диагностики ВГВ или ВГС на момент написания данного обзора ГОСТов не найдено. ПЦР как метод имеет гораздо более широкие возможности применения, поэтому существующих ГОСТов явно недостаточно для стандартизации МИ на основе метода ПЦР в более широком применении.

По сравнению с другими методами диагностики in vitro ПЦР является высокочувствительным методом детекции, поэтому в европейских и российских регламентирующих документах к анализу с помощью ПЦР предъявляется ряд особых требований для снижения риска контаминации [12]:

• транспортировку и хранение образцов нужно проводить в условиях, предотвращающих их контаминацию целевой последовательностью извне, дегратдацию нуклеиновой кислоты, а также ингибирование ПЦР;
• предотвращение контаминации в процессе проведения анализа. Для этого анализ разбивают на этапы и делят пространство, в котором проводится анализ, на зоны:
  • зона подготовки ПЦР-смеси (зона, в которой готовят реагенты, не контактировавшие с целевой последовательностью, например, праймеры, буферы, ферменты и т. д.);
  • зона пре-ПЦР (зона подготовки реагентов, образцов и контролей к ПЦР);
  • зона ПЦР (амплификация целевой последовательности в закрытой системе);
  • зона пост-ПЦР детекции (необходима только для систем с детекцией ампликонов отдельно от амплификации, например, электрофорезом).

Следует отметить, что данные требования в большей степени относятся к организации работы лабораторий, которую отдельно регламентирует ГОСТ Р ИСО 15189-2009 (идентичен международному стандарту ISO 15189:2007) [19].

...

Петров В.В.