Видовая идентификация влагалищных лактобацилл, выделенных у женщин репродуктивного возраста

Цель исследования. Определить видовой состав микроаэрофильных лактобацилл у женщин репродуктивного возраста при нормоценозе, мезоценозе и бактериальном вагинозе.
Материал и методы. Изучено 386 изолятов лактобацилл, выделенных из влагалища 30 небеременных женщин репродуктивного возраста, среди которых у 10 был нормоценоз,,у 10 – мезоценоз (10) и у 10 – бактериальный вагиноз. Видовую идентификацию лактобацилл проводили по белковому спектру методом масс-спектрометрии. Изучена способность всех изолятов к синтезу перекиси водорода, а также штаммовая гетерогенность методом REP-ПЦР типирования.
Результаты исследования. До вида были идентифицированы 379 изолятов лактобацилл (98,2%). Выделено 6 видов рода Lactobacillus со значительным превалированием трех видов: L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri (94,7%). У большинства женщин каждой группы изоляты лактобацилл были представлены каким-либо одним видом: при нормоценозе – L. crispatus (59,4% изолятов), при мезоценозе – L. jensenii (53,6%), при бактериальном вагинозе – примерно по 30% одного из трех ведущих видов. У женщин с нормоценозом 96,7% изолятов лактобацилл продуцировали перекись водорода, при мезоценозе 30% изолятов теряли такую способность, а при бактериальном вагинозе она отсутствовала почти у 50% изолятов. Изоляты, выделенные от одной женщины и принадлежащие к одному виду, не отличались по геномным ПЦР-фингерпринтам, что свидетельствует о принадлежности их к одному штамму, но при этом отмечена разная способность изолятов продуцировать перекись водорода.
Заключение. В составе резидентной микрофлоры влагалища у женщин репродуктивного возраста доминируют 3 вида лактобацилл (L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri) независимо от состояния микробиоты влагалища (нормоценоз, мезоценоз или бактериальный вагиноз). Индивидуальные популяции лактобацилл гомогенны по видовому составу у большинства женщин, изоляты генетически принадлежат к одному штамму, но могут различаться по способности продуцировать перекись водорода, что свидетельствует в пользу мнения об эпигеномном наследовании этого признака.

Частота оппортунистических инфекций влагалища имеет тенденцию к росту, несмотря на все расширяющийся арсенал применяемых в клинической практике антимикробных средств [2]. Механизмы развития этой патологии до настоящего времени остаются нераскрытыми. Расшифровать их невозможно без детального изучения связей макроорганизма и микробиоты влагалища здоровых женщин. Представление о Lactobacillus acidophilus как о практически единственном представителе нормальной микрофлоры влагалища со времен Дедерлейна непоколебимо просуществовало почти столетие. Только с внедрением молекулярно-генетических методов исследования появилась возможность на новом методическом уровне изучать композиционные особенности состава микробиоты влагалища, которая играет важную роль в колонизационной резистентности этого органа как защитного барьера репродуктивной системы в целом [3, 4, 8]. Первые исследования показали значительное видовое разнообразие лактофлоры и отличия ее в разных этнических группах женщин и в различных регионах мира, что, по-видимому, является генетически обусловленным [3, 6]. Такие исследования могут стать базой для новых терапевтических стратегий в лечении влагалищных инфекций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, а также основой для отбора штаммов при создании биопрепаратов.

В России не было систематических исследований по видовой идентификации влагалищных
лактобацилл у женщин различных возрастных групп и при различном состоянии микроценоза
(микробиоты) влагалища. Проблема внутривидового (штаммового) разнообразия лактобацилл
также практически не изучена ни в России, ни в других странах.

Целью настоящего исследования было определить видовой состав лактобацилл у женщин
репродуктивного возраста при различном состоянии микробиоты влагалища: при нормоценозе,
промежуточной форме (мезоценозе) и бактериальном вагинозе.

Материал и методы исследования

Изучено 386 изолятов лактобацилл, полученных из отделяемого влагалища 30 небеременных
женщин репродуктивного возраста. Были сформированы 3 группы по 10 женщин в зависимости
от результатов микробиологической диагностики состояния микробиоты влагалища: «нормоценоз», «бактериальный вагиноз» и «мезоценоз». Оценку состояния микроценоза влагалища проводили на основе критериев R.P. Nugent [7], модифицированных нами [1].

Посев отделяемого влагалища (образец), взятого стерильным дакроновым тампоном, проводили на чашку Петри с плотной селективной минерально-растительной средой (МРС). Посевы культивировали в течение 48 ч в микроаэрофильных условиях при температуре 37 ˚С. Из каждого образца отбирали по 10–15 колоний (изолятов), по возможности, разной морфологии, которые по предварительным тестам (рост на селективной среде, грамположительные каталазоотрицательные палочки) были отнесены к роду Lаctobacillus. Каждый изолят рассевали петлей методом истощения до получения морфологически однородных отдельных колоний (морфологию колоний контролировали с использованием бинокулярного стереомикроскопа) и отсевали в жидкую среду МРС для накопления биомассы.

Видовую идентификацию всех 386 клинических изолятов проводили по белковому спектру методом MALDI TOF масс-спектрометрии, используя масс-спектрометр Microflex и программный продукт MALDI Biotyper 2.0 фирмы Bruker Daltonics (Германия)...

Исаева А.С., Летаров А.В., Ильина Е.Н., Боровская А.Д., Муравьёва В.В., Анкирская А.С.