Акушерство и Гинекология №3 / 2012

Видовая идентификация влагалищных лактобацилл, выделенных у женщин репродуктивного возраста

1 мая 2012

Институт Микробиологии им. С.Н. Виноградского РАН, Москва; ФГУ НИИ физико-химической медицины ФМБА России, Москва; ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздравсоцразвития России, Москва

Цель исследования. Определить видовой состав микроаэрофильных лактобацилл у женщин репродуктивного возраста при нормоценозе, мезоценозе и бактериальном вагинозе.
Материал и методы. Изучено 386 изолятов лактобацилл, выделенных из влагалища 30 небеременных женщин репродуктивного возраста, среди которых у 10 был нормоценоз,,у 10 – мезоценоз (10) и у 10 – бактериальный вагиноз. Видовую идентификацию лактобацилл проводили по белковому спектру методом масс-спектрометрии. Изучена способность всех изолятов к синтезу перекиси водорода, а также штаммовая гетерогенность методом REP-ПЦР типирования.
Результаты исследования. До вида были идентифицированы 379 изолятов лактобацилл (98,2%). Выделено 6 видов рода Lactobacillus со значительным превалированием трех видов: L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri (94,7%). У большинства женщин каждой группы изоляты лактобацилл были представлены каким-либо одним видом: при нормоценозе – L. crispatus (59,4% изолятов), при мезоценозе – L. jensenii (53,6%), при бактериальном вагинозе – примерно по 30% одного из трех ведущих видов. У женщин с нормоценозом 96,7% изолятов лактобацилл продуцировали перекись водорода, при мезоценозе 30% изолятов теряли такую способность, а при бактериальном вагинозе она отсутствовала почти у 50% изолятов. Изоляты, выделенные от одной женщины и принадлежащие к одному виду, не отличались по геномным ПЦР-фингерпринтам, что свидетельствует о принадлежности их к одному штамму, но при этом отмечена разная способность изолятов продуцировать перекись водорода.
Заключение. В составе резидентной микрофлоры влагалища у женщин репродуктивного возраста доминируют 3 вида лактобацилл (L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri) независимо от состояния микробиоты влагалища (нормоценоз, мезоценоз или бактериальный вагиноз). Индивидуальные популяции лактобацилл гомогенны по видовому составу у большинства женщин, изоляты генетически принадлежат к одному штамму, но могут различаться по способности продуцировать перекись водорода, что свидетельствует в пользу мнения об эпигеномном наследовании этого признака.

Частота оппортунистических инфекций влагалища имеет тенденцию к росту, несмотря на все расширяющийся арсенал применяемых в клинической практике антимикробных средств [2]. Механизмы развития этой патологии до настоящего времени остаются нераскрытыми. Расшифровать их невозможно без детального изучения связей макроорганизма и микробиоты влагалища здоровых женщин. Представление о Lactobacillus acidophilus как о практически единственном представителе нормальной микрофлоры влагалища со времен Дедерлейна непоколебимо просуществовало почти столетие. Только с внедрением молекулярно-генетических методов исследования появилась возможность на новом методическом уровне изучать композиционные особенности состава микробиоты влагалища, которая играет важную роль в колонизационной резистентности этого органа как защитного барьера репродуктивной системы в целом [3, 4, 8]. Первые исследования показали значительное видовое разнообразие лактофлоры и отличия ее в разных этнических группах женщин и в различных регионах мира, что, по-видимому, является генетически обусловленным [3, 6]. Такие исследования могут стать базой для новых терапевтических стратегий в лечении влагалищных инфекций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, а также основой для отбора штаммов при создании биопрепаратов.

В России не было систематических исследований по видовой идентификации влагалищных
лактобацилл у женщин различных возрастных групп и при различном состоянии микроценоза
(микробиоты) влагалища. Проблема внутривидового (штаммового) разнообразия лактобацилл
также практически не изучена ни в России, ни в других странах.

Целью настоящего исследования было определить видовой состав лактобацилл у женщин
репродуктивного возраста при различном состоянии микробиоты влагалища: при нормоценозе,
промежуточной форме (мезоценозе) и бактериальном вагинозе.

Материал и методы исследования

Изучено 386 изолятов лактобацилл, полученных из отделяемого влагалища 30 небеременных
женщин репродуктивного возраста. Были сформированы 3 группы по 10 женщин в зависимости
от результатов микробиологической диагностики состояния микробиоты влагалища: «нормоценоз», «бактериальный вагиноз» и «мезоценоз». Оценку состояния микроценоза влагалища проводили на основе критериев R.P. Nugent [7], модифицированных нами [1].

Посев отделяемого влагалища (образец), взятого стерильным дакроновым тампоном, проводили на чашку Петри с плотной селективной минерально-растительной средой (МРС). Посевы культивировали в течение 48 ч в микроаэрофильных условиях при температуре 37 ˚С. Из каждого образца отбирали по 10–15 колоний (изолятов), по возможности, разной морфологии, которые по предварительным тестам (рост на селективной среде, грамположительные каталазоотрицательные палочки) были отнесены к роду Lаctobacillus. Каждый изолят рассевали петлей методом истощения до получения морфологически однородных отдельных колоний (морфологию колоний контролировали с использованием бинокулярного стереомикроскопа) и отсевали в жидкую среду МРС для накопления биомассы.

Видовую идентификацию всех 386 клинических изолятов проводили по белковому спектру методом MALDI TOF масс-спектрометрии, используя масс-спектрометр Microflex и программный продукт MALDI Biotyper 2.0 фирмы Bruker Daltonics (Германия)...

Исаева А.С., Летаров А.В., Ильина Е.Н., Боровская А.Д., Муравьёва В.В., Анкирская А.С.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.