Урология №1 / 2018
Видовая струк- тура и молекулярно-генетическая характеристика антибио- тикорезистентных штаммов грамотрицательных микроорганизмов, выделенных от пациентов урологического отделения
1 Казахский медицинский университет непрерывного образования, Алматы, Казахстан; 2 Казахский национальный медицинский университет им. С. Д. Асфендиярова, Алматы, Республика Казахстан; 3 Кыргызская государственная медицинская академия им. И. К. Ахунбаева, Бишкек, Кыргызская Республика
Цель: провести анализ структуры и молекулярных механизмов антибиотикорезистентности грамотрицательных бактерий – возбудителей инфекций мочевыводящих путей (ИМП) у взрослых пациентов Алматы.
Материалы и методы. Изучены этиологическая структура и антибиотикочувствительность клинически значимых изолятов бактерий и грибов (≥ 103), выделенных из мочи пациентов отделения урологии ЦГКБ № 12 Алматы. Продукцию β-лактамаз расширенного спектра действия (БЛРС) у антибиотикорезистентных штаммов определяли фенотипическим методом двойных дисков. Детекцию генов класса А для культур с подтвержденным БЛРС-фенотипом (TEM1, CTX-M1, SHV, OXA), генов карбапенемаз класса B металло-β-лактамаз (VIM-2) проводили методом ПЦР.
Результаты. Среди изолятов, полученных от пациентов, доля представителей семейства Enterobacteriaceae в этиологической структуре возбудителей ИМП составила 44,8%, в том числе E. coli была возбудителем в 31% случаев, K. pneumoniae – в 4,6%. Наибольшей активностью по отношению ко всем видам энтеробактерий обладали карбапенемы (96,3–100%). В отношении E. coli высокую активность проявляли нитрофурантоин (96,3%), амикацин (92,6%) и цефокситин (81,5%). Высокая частота резистентности к цефалоспоринам III–IV поколений E. coli (44,4%), K. pneumoniae (50%) была обусловлена продукцией БЛРС CTX-M1- и OXA-типов. Доля неферментирующих грамотрицательных бактерий в этиологической структуре возбудителей ИМП составила 3,5%. Среди них зарегистрирован штамм, продуцирующий металло-β-лактамазу (VIM-2), характеризующийся абсолютной резистентностью к антибиотикам всех классов, включая карбапенемы.
Заключение. Полученные данные по профилям чувствительности и молекулярно-генетическим механизмам резистентности грамотрицательных уропатогенов уникальны для региона (Алматы), позволяют разработать тактику рациональной антибиотикотерапии. Своевременная микробиологическая диагностика и строгое соблюдение мер инфекционного контроля в конкретном стационаре – единственный путь сдерживания распространения БЛРС, МБЛ.
Введение. Поиск новых подходов к лечению инфекций в урологии, систематизации и стандартизации схем лечения в клинической практике диктует необходимость постоянного мониторинга эпидемиологической ситуации, знания структуры возбудителей, изучения уровня резистентности микроорганизмов по регионам.
Известно, что в этиологической структуре возбудителей внутрибольничных и внебольничных инфекций мочевыводящих путей (ИМП) ведущая роль принадлежит грамотрицательным микроорганизмам. По данным многочисленных исследований, примерно в 50–90% случаев этиологическим фактором выступает E. coli [1–6]. При этом отмечается некоторое увеличение (по сравнению с неосложненными) доли K. pneumoniae (10,3%) и P. aeruginosa (4,3%) в структуре возбудителей осложненных ИМП [7].
В настоящее время одной из наиболее клинически значимых проблем химиотерапии является резистентность возбудителей к современным цефалоспоринам и карбапенемам вследствие эпидемического распространения штаммов, продуцирующих β-лактамазы расширенного спектра действия (БЛРС), металло-β-лактамазы класса B (МБЛ) [8–16]. Также при планировании политики антимикробной терапии целесообразно опираться на локальные (региональные) данные, полученные в данной стране или в ее регионе.
Цель: провести анализ структуры и молекулярных механизмов антибиотикорезистентности грамотрицательных бактерий – возбудителей ИМП у взрослых пациентов Алматы.
Материалы и методы. В исследование было включено 87 клинически значимых изолятов (≥103 КОЕ/мл) бактерий и грибов, собранных от пациентов с ИМП отделения урологии ГКБ № 12 Алматы в рамках внутривузовского научного проекта «Мониторинг резистентности возбудителей внебольничных и нозокомиальных инфекций к антимикробным препаратам и изучение его молекулярных механизмов».
Микробиологическое выделение из мочи и первичная идентификация бактериальных изолятов проведены в лаборатории кафедры микробиологии КазНМУ им. С. Д. Асфендиярова. Окончательную видовую идентификацию и определение их чувствительности к антимикробным препаратам осуществили в НКДЛ НИИ им. Атчабарова. Все исследованные изоляты были идентифицированы до вида, была определена их антибиотикочувствительность на бактериологическом автоматизированном анализаторе VITEK-2 Compact, дополнительно использован классический дискодиффузионный метод определения антибиотикочувствительности на агаре Мюллера–Хинтона, согласно рекомендациям EUCAST [17].
Продукцию БЛРС определяли с помощью фенотипического метода двойных дисков по наличию расширенной зоны подавления роста между дисками с цефтазидимом (CAZ, 30 мкг), цефепимом (CPM, 30 мкг) и диском, содержащим комбинацию амоксициллина с клавулановой кислотой (AMC 20/10 мкг) [18]. Для контроля качества определения чувствительности использованы штаммы E. coli ATCC 25922, K. pneumoniae ATCC 700603 (ESBL+).
Детекцию наиболее распространенных и клинически значимых генов класса А (TEM1, СTX-M1, SHV, OXA) для культур с подтвержденным ESBL-фенотипом проводили методом ПЦР [19]. Геномную и плазмидную ДНК грамотрицательных бактерий выделяли по стандартной методике с помощью набора Easy Pure Bacteria Genomic DNA Kit (выделение геномной ДНК) и Easy Pure Plasmid MiniPrep Kit (выделение плазмидной ДНК) («TransGenBiotech», Китай). Использовали по 5 мл 18–20-часовой культуры бактерий.
Использованные праймеры для проведения ПЦР на 4 пары генов БЛРС (TEM1, CTX-M1, SHV, OXA) приведены в табл. 1.
