Влияние аллоферона на цитотоксическую активность NK-клеток у больных хронической вирусной инфекцией Эпштейна–Барр

Цель исследования. Изучение влияния аллоферона на количество копий ДНК вируса Эпштейна–Барр (ВЭБ) в образцах слюны, динамику содержания натуральных киллеров и изменения цитотоксической активности киллерных клеток у больных хронической вирусной инфекцией Эпштейна–Барр (ХВИЭБ) через 6 нед. после окончания терапии.
Материал и методы. 100 пациентов (69 женщин и 31 мужчина), страдающих ХВИЭБ, были разделены на 2 группы. В течение 2 мес. пациенты 1-й группы (n = 70) получали терапию аллофероном (9 инъекций п/к по 1,0 мг через день), пациенты 2-й группы (n = 30) – валацикловиром (валтрекс) Определяли количество ДНК ВЭБ в образцах слюны методом ПЦР; цитотоксическую активность киллерных клеток (NK-клеток) оценивали по спонтанной и индуцированной экспрессии CD107a (LAMP, количество NK-клеток).
Результаты. Через 6 нед. после окончания терапии у 38 (54,28%) больных в 1-й группе и у 9 (30,0%) больных во 2-й группе ДНК ВЭБ не обнаружена (р = 0,001).
Заключение. Аллоферон оказывает выраженный эффект на снижение количества копий ДНК ВЭБ в образцах слюны, индуцирует экспансию NK-клеток и цитотоксическую активность NK-клеток у больных ХВИЭБ.

Важное значение в формировании противовирусного иммунного ответа играют натуральные киллеры (NK-клетки), которые уничтожают вирус-инфицированные и опухолевые клетки посредством гранул, содержащих перфорин и гранзимы, внеклеточных лиганд, включая Fas-лиганды (FasL) и лиганд, индуцирующих апоптоз и экзоцитоз цитолитических гранул [1]. Взаимодействие вируса с клеткой хозяина происходит при взаимодействии со специфическими рецепторами на плазматической мембране либо с помощью клатрин- или кавеолин-зависимого эндоцитоза вирусной частицы. Проникновение вируса Эпштейна–Барр (ВЭБ) осуществляется посредством экспрессии рецептора CD21 и ко-рецептора HLA-II после межклеточного взаимодействия [2]. При взаимодействии NK-клеток с CD21+ ВЭБ-инфицированными клетками они могут временно приобретать слабый фенотип CD21+ за счет синаптического переноса небольшого количества рецепторных молекул на собственную мембрану. Эти эктопические рецепторы позволяют ВЭБ связываться с новой NK-клеткой хозяина. Вирусы способны ингибировать цитотоксичность NK-клеток или индуцировать апоптоз, что играет роль в механизме уклонения от иммунного ответа. В эксперименте in vitro установлено, что при инфицировании ВЭБ происходит деформация NK-клеток и увеличение их размера [3]. Ингибирование или изменение небольшой субпопуляции NK-клеток оказывает существенное влияние на формирование адаптивного иммунного ответа на вирусные инфекции [4, 5].

Цитолитическую функцию NK-клеток могут инициировать различные процессы, включая дегрануляцию и лигирование рецепторов смерти, которые являются критическими для скорости очищения как больных, так и дисфункциональных клеток [6]. При стимуляции NK-клетки продуцируют интерферон-гамма (IFN-γ) и фактор некроза опухоли-альфа (TNF- α), они обладают цитолитическими функциями, которые сходны с функциями цитотоксических CD8+-лимфоцитов [7]. Цитотоксичность NK-клеток регулируют 3 основных процесса: распознавание клеток-мишеней; контакт с клетками-мишенями и образование иммунологического синапса (IS); индуцированная NK-клетками гибель клеток-мишеней. Механизм гибели включает активацию рецепторов смерти, присутствующих на поверхности клетки-мишени, в результате инициируется внешний апоптотический путь. Цитотоксичность NK-клеток обусловлена высвобождением литических гранул в клетку-мишень посредством слияния мембран в IS. В результате происходят реорганизация цитоскелета и полимеризация актина в IS, поляризация центра микротрубочек в направлении клетки-мишени [8]. Поляризованные литические гранулы сливаются с мембраной клетки-мишени и высвобождают ферменты, которые активируют в ней программу внутреннего апоптоза.

Компартмент NK-клеток периферической крови человека составляет от 5 до 15% лимфоцитов и состоит из разных стадий дифференцировки. Роль NK-клеток при хронической ВЭБ-инфекции до конца не изучена. При воздействии ВЭБ-инфицированных В-клеток, экспрессирующих литические антигены, часть NK-клеток дегранулирует и пролиферирует. По выраженности экспрессии CD56 компартмент NK-клеток крови состоит из 2 субпопуляций: CD56brightCD16 и CD56dimCD16+ [9]. CD56brightCD16 продуцируют большое количество цитокинов, после длительной активации приобретают цитотоксичность, обогащаются во вторичных лимфоидных органах, где дифференцируются до CD56dimCD16+ NK-клеток, составляя в периферической крови около 90%. CD56dimCD16+ представлены зрелыми терминально дифференцированными NK-клетками с выраженными цитотоксическими свойствами [10].

Из гемолимфы светлячка Calliphoravicina были получены катионные пептиды аллоферон 1 и 2. Они состоят из 12 и 13 аминокислотных остатков (HGVSGHGQHGVHG и GVSGHGQHGVHG соответственно). Аллоферон 2 соответствует усеченной на N-конце форме аллоферона 1. Наиболее активным из них является аллоферон 1, который: 1) стимулирует естественную цитотоксичность лимфоцитов периферической крови человека; 2) индуцирует продукцию IFN в эксперименте у мышей и людей; 3) повышает противовирусную и противоопухолевую резистентность у мышей [11]. В 2003 г. в Российской Федерации разработан препарат аллокин-альфа («Бренд-Фарм», Россия) – антивирусный препарат нового типа, разработанный международным коллективом ученых (регистрационный № 002829/01 от 22.09.2003). Действующим веществом препарата является цитокиноподобный пептид аллоферон (гистидил-глицил-валил-серил-глицил-гистидил-глицил-глутамил-гистидил-глицил-валил-гистидил-глицин).

Цель исследования – изучение влияния аллоферона на содержание количества копий ДНК ВЭБ в образцах слюны методом Real-time ПЦР на динамику содержания натуральных киллеров и изменения цитотоксической активности NK-клеток у больных хронической вирусной инфекцией Эпштейна–Барр (ХВИЭБ) через 6 нед. после окончания терапии.

Материалы и методы

В исследование были включены 100 пациентов, страдающих ХВИЭБ. Группа состояла из 69 женщин и 31 мужчины. Средний возраст пациентов –34,64 ± 1,21 года, длительность течения заболе...

Ракитянская И.А., Рябова Т.С., Калашникова А.А.