Влияние препаратов, применяемых в качестве триггера овуляции, и возраста женщины на исходы программ лечения бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий с использованием селекции сперматозоидов на ооцит-кумулюсных комплексах

Цель: Оценить влияние препарата, применяемого в качестве триггера овуляции, и возраста женщины на исходы программ лечения бесплодия методами ВРТ при селекции сперматозоидов на клетках кумулюса.
Материалы и методы: В исследование были включены 267 супружеских пар, проходящих лечение бесплодия методами ВРТ. Проведена оценка клинических и эмбриологических показателей цикла ВРТ. Анализируемую группу составили 130 пациентов (группа КК), которым был произведен отбор сперматозоидов на клетках кумулюса с последующим проведением процедуры ИКСИ. Группу сравнения составили 137 пациентов, которым была выполнена стандартная процедура ИКСИ с отбором сперматозоидов по морфологическим характеристикам (группа ИКСИ). Каждая группа была разделена на две: женщины до 35 лет и 36 лет и старше. Для оценки влияния протокола стимуляции функции яичников были выделены группы женщин по виду триггера финального созревания фолликулов: хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) (n=182) и агонист гонадотропин-рилизинг-гормона (аГнРГ) (n=52). Части женщин перенос в полость матки не осуществляли (n=33). На эмбриологическом этапе использовали среды VitroLife (Швеция). В полость матки переносили строго один эмбрион. Полученные данные обрабатывали методами параметрической и непараметрической статистики с помощью пакета программ SPSS Statistics (США).
Результаты: Согласно полученным данным, в группе молодых женщин до 35 лет абсолютное число полученных бластоцист на 5-е сутки культивирования значимо больше в группе с применением селекции на КК по сравнению с традиционным ИКСИ (Ме 2 (1; 3) и 3 (1; 5), p=0,02). Пациентки позднего репродуктивного возраста (36 лет и старше) также показали статистически значимо большее число бластоцист на 5-е сутки культивирования при селекции сперматозоидов с помощью КК (р=0,03). При оценке влияния триггера финального созревания фолликулов было выявлено, что при использовании ХГЧ и селекции сперматозоидов на КК достоверно выше частота имплантации эмбрионов в полости матки (КК 44,9%; ИКСИ 17,9%; р=0,01); при этом частота родов значимо не отличалась независимо от возраста женщины.
Заключение: Проведенное исследование показывает, что технология селекции сперматозоидов с помощью КК в программах лечения бесплодия методами ВРТ может быть успешно реализована у разных возрастных групп женщин, что позволит увеличить число эмбрионов на стадии бластоцисты, пригодных для переноса в полость матки и криоконсервации. При этом частота имплантации может быть повышена только у тех женщин, у которых триггером финального созревания ооцитов был экзогенный ХГЧ. Полученные в работе данные дают надежду на разработку еще более совершенных методов селекции сперматозоидов in vitro, которые бы имитировали физиологические условия в женском репродуктивном тракте.

Вклад авторов: Чистякова А.В. – сбор и анализ клинических данных, обработка исходного материала и написание статьи; Макарова Н.П. – сбор и анализ эмбриологических данных, анализ результатов; Непша О.С. – анализ результатов, статистическая обработка, клиническая интерпретация; Смольникова В.Ю. – редактирование рукописи, критический анализ; Калинина Е.А. – утверждение рукописи статьи.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Финансирование: Работа выполнена при финансовой поддержке государственного задания МЗ РФ №121040600410-7
«Решение проблемы бесплодия в современных условиях путем разработки клинико-диагностической модели бесплодного брака и использования инновационных технологий в программах вспомогательной репродукции».
Одобрение Этического комитета: Исследование было одобрено локальным Этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ АГП им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России.
Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Чистякова А.В., Макарова Н.П., Непша О.С., Смольникова В.Ю., Калинина Е.А. Влияние препаратов, применяемых в качестве триггера овуляции, и возраста женщины на исходы программ лечения бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий с использованием селекции сперматозоидов на ооцит-кумулюсных комплексах.
Акушерство и гинекология. 2023; 6: 99-106
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2023.78

В яичниках человека ооциты находятся внутри фолликулов, заполненных фолликулярной жидкостью, полость которых выстилают соматические гранулезные клетки. В антральном фолликуле женскую гамету окружают клетки кумулюса (КК), специализированная подгруппа гранулезных клеток. КК дифференцируются из пристеночных гранулезных клеток под действием факторов, секретируемых ооцитами, и гормонов яичников. Самые внутренние слои КК, называемые corona radiata, находятся в непосредственном контакте с ооцитом через трансзональные выступы. Эти отростки клеток гранулезы проникают через блестящую оболочку ооцита и образуют специализированные соединения с оолеммой. Все обозначенные группы клеток участвуют не только в поддержании жизнеспособности ооцита, но и в дистантном взаимодействии гамет при оплодотворении. Сперматозоиды способны двигаться по направлению выделяемого КК хемоаттрактанта [1, 2]. В настоящее время активно изучаются КК методами современной молекулярной биологии для более глубокого понимания процессов оплодотворения у человека и повышения эффективности лечения бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) [3]. Показано, что лишь небольшая доля сперматозоидов может преодолеть множественные препятствия в женских половых путях и достигнуть места оплодотворения. КК служат барьером для сперматозоидов без акросомы. Только мужские половые клетки с интактной акросомой способны связаться с блестящей оболочкой ооцита и проникнуть внутрь клетки. В рутинной практике экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) достаточно просто получить КК пациентки и использовать их в чашке Петри для совершенствования эмбриологического этапа программ ВРТ, улучшая исходы программ лечения бесплодия.

В опубликованной нами ранее работе было показано, что при использовании селекции сперматозоидов на КК улучшаются эмбриологические показатели программ ВРТ – повышается частота оплодотворения и бластуляции, особенно в группе супружеских пар с выраженным фактором мужского бесплодия [4].

Цель настоящего исследования: оценить вклад возраста женщины и влияние препарата, применяемого как триггер овуляции, на исходы программ лечения бесплодия методами ВРТ при селекции сперматозоидов на КК. Именно возраст женщины является критическим фактором, в большей степени определяющим исходы программ лечения [5]. Пациентки позднего репродуктивного возраста чаще сталкиваются со снижением овариального резерва, повышением суммарной дозы гонадотропинов, отсутствием оплодотворения ооцитов, остановкой раннего эмбриогенеза. Именно поэтому целесообразно совершенствовать эмбриологический этап программ ВРТ для женщин позднего репродуктивного возраста, внедряя новые методы селекции сперматозоидов и условия культивирования.

Материалы и методы

В исследование были включены мужчины и женщины, проходившие программы ВРТ в отделении вспомогательных технологий в лечении бесплодия имени профессора Б.В. Леонова ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава РФ с января 2020 г. по декабрь 2022 г. Критериями включения служили следующие параметры: возраст женщины от 18 лет до 45 лет; подписанное информированное добровольное согласие на участие в исследовании; уровень антимюллерова гормона в крови женщины больше или равно 1 нг/мл на 2–3-й день менструального цикла; присутствие живых сперматозоидов в эякуляте у партнера не менее 50%; прогрессивная подвижность сперматозоидов в нативном эякуляте PR не менее 12%; концентрация сперматозоидов не менее 1 млн/мл. Всего были включены 267 супружеских пар. Анализируемую группу составили 130 пациентов (группа КК), которым был произведен отбор сперматозоидов на КК с последующим проведением процедуры ИКСИ. Группу сравнения составили 137 пациентов, которым была выполнена стандартная процедура ИКСИ с отбором сперматозоидов по морфологическим характеристикам (группа ИКСИ). По возрасту каждая группа была разделена на две: женщины до 35 лет и 36 лет и старше. Для оценки влияния триггера овуляции при стимуляции функции яичников на исходы программ ВРТ женщины были разделены на группы: хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) и агонист гонадотропин-рилизинг-гормона (аГнРГ). При этом были исключены пациентки, которым по тем или иным причинам перенос эмбриона в полость матки не производили (не­­удовлетворительное качество эмбриона, неадекватный рост эндометрия, соматическое заболевание). Всего были проанализированы данные 234 женщин.

Все супружеские пары перед вступлением в программу лечения бесплодия методами ВРТ прошли полное обследование согласно действующим регламентирующим документам. Программу ВРТ проводили по общепринятой методике. Стимуляцию функции яичников выполняли со 2–3-го дня менструального цикла препаратами антагοнистов ГнРГ и рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона или менопаузального гонадотропина человека. Для предотвращения преждевременного...

Чистякова А.В., Макарова Н.П., Непша О.С., Смольникова В.Ю., Калинина Е.А.