Возможности родоразрешения пациенток, которым в ходе предшествующего кесарева сечения вводились экстрацеллюлярные микровезикулы мезенхимальных стромальных клеток

Цель: Оценить течение послеоперационного периода у пациенток, которым в ходе предшествующего кесарева сечения вводились экзосомы – экстрацеллюлярные микровезикулы (ЭМВ) мезенхимальных стромальных клеток (МСК), и результаты их повторного родоразрешения.
Материалы и методы: Основную группу составили 60 женщин, которым вводилось 500 мкл ЭМВ МСК. В группу контроля вошли 100 пациенток без экзосомной поддержки. На этапе родоразрешения пациентки были дополнительно разделены на подгруппы: a – самопроизвольные роды и b – повторное кесарево сечение.
Результаты: У родильниц основной группы не было гнойно-септических осложнений, в группе сравнения послеродовый период осложнился в 6% эндометритом и в 2% – лохиометрой. У 5/8 (62,5%) пациенток основной группы роды завершились самопроизвольно, у 16/20 (80%) женщин контрольной группы выполнено повторное кесарево сечение. Проведено патоморфологическое исследование 19 биоптатов иссеченных рубцов.
Заключение: Показана высокая эффективность интраоперационного введения ЭМВ для формирования полноценного рубца, по сравнению с группой контроля. У 5/8 (62,5%) пациенток с экзосомной поддержкой удалось достичь самопроизвольных родов, в контрольной группе данный показатель составил 4/20 (20%). Исследование показало возможность использования ЭМВ МСК для снижения частоты кесарева сечения у пациенток с рубцом на матке после абдоминального родоразрешения.

В эпоху XXI в. наметилась долгожданная смена парадигмы в плане повторного абдоминального родоразрешения у пациенток с рубцом на матке. Это связано с практически двукратным ростом частоты кесарева сечения с 250,7 тыс. в 2005 г. до 422,5 тыс. в 2020 г. и, как результат, с ростом частоты гнойно-септических осложнений и разрывов матки. В структуре показаний для повторного кесарева сечения рубец миометрия занимает первое место. В этой связи назрела настойчивая необходимость в поиске новых методов повышения эффективности репарации миометрия после перенесенной операции, чтобы спустя 2–3 года интергенетического интервала женщины могли родить самопроизвольно. Для повышения регенерации тканей в клинической медицине на протяжении 15 лет с успехом используются клеточные технологии [1–3]. Тем не менее, существуют определенные трудности для их широкого внедрения [4–7]. Среди многообразия уникальных механизмов действия стволовых клеток заслуживает самого пристального внимания их способность взаимодействия и обмена, как белковым, так и генетическим материалом посредством секреции микровезикул. Эти межклеточные коммуникаторы перспективны в плане улучшения репарации тканей, поскольку они могут участвовать в передаче межклеточной информации и работать в качестве модулятора [8–13].

Основываясь на выше изложенном, мы полагаем, что использование экстрацеллюлярных микровезикул (ЭМВ) улучшает течение послеоперационного периода и повышает шансы для дальнейшего самопроизвольного родоразрешения пациенток с рубцом на матке после кесарева сечения. Данный оптимизм основан на проведенных экспериментальных исследованиях, в ходе которых была создана модель кесарева сечения у лабораторных крыс инбредной линии Wag. Уже 4 года назад была убедительно продемонстрирована способность экзосом находиться в миометрии, как интактных животных, так и после произведенного кесарева сечения не менее 8 суток [14–18].

Цель исследования: оценить течение послеоперационного периода у пациенток, которым в ходе предшествующего кесарева сечения вводились ЭМВ мезенхимальных стромальных клеток (МСК) плацентарного происхождения и результаты их повторного родоразрешения.

Материалы и методы

Обследованы и родоразрешены 160 пациенток. В зависимости от ведения послеоперационного периода все они были разделены на 2 группы: 1-я группа (основная) – 60 беременных и рожениц, которым в ходе кесарева сечения после ушивания матки однорядным непрерывным викриловым швом в область разреза вводилось 500 мкл ЭМВ МСК, полученных в лаборатории клеточных технологий ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» (НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова) [14, 15, 19]. 2-я группа (конт­рольная) – 100 беременных и рожениц, которым в ходе кесарева сечения проводилось традиционное ушивание нижнего сегмента матки однорядным непрерывным викриловым швом.

В зависимости от тактики родоразрешения беременные основной и контрольной групп были дополнительно разделены на подгруппы: a – роды per vias naturalis и b – повторное кесарево сечение. Все пациенты подписали информированное согласие на введение экзосом.

Получение культуры МСК

Материал пуповины человека был получен после родов здоровых женщин в возрасте от 25 до 30 лет, которые родили здоровых доношенных детей путем кесарева сечения в НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова. Образцы пуповин, полученных после рождения, промывали в фосфатно-солевом буферном физиологическом растворе (ФСБ) («ПанЭко», Москва, Россия) несколько раз. После удаления кровеносных сосудов ткань пуповины измельчали на фрагменты размером 1–2 мм3. Клетки выращивали в полной питательной среде (ППС) состоящей из культуральной среды DMEM/F12 («БИОЛОТ», Москва, Россия) (1:1), 7% фетальной бычьей сыворотки (HyClone, Cytiva, Австрия) с добавлением пенициллина (100 ЕД/мл), стрептомицина (100 мкг/мл) (Gibco, Нью-Йорк, США) и 2 мм L-глутамина («ПанЭко», Москва, Россия) и инкубировали во влажной атмосфере с 5% СО2 при 37°С. Питательную среду заменяли раз в 3–4 дня. Эту же среду использовали для получения ЭМВ, продуцируемых МСК. Для этого ее предварительно центрифугировали (108 000×g в течение 1,5 ч при 4°C) с целью очищения от ЭМВ содержащихся в фетальной бычьей сыворотке. Центрифугированную среду добавляли к МСК на 3-м пассаже, достигшем конфлюэнтности 80–90% и отбирали через 24 ч. Рост и морфологию клеток контролировали ежедневно под инвертированным световым микроскопом. По достижении 80% конфлюэнтности, клетки трипсинизировали, центрифугировали (1600×g в течение 3 мин.), ресуспендировали в ППС и пересаживали на новые культуральные флаконы. МСК, использованные в работе, были положительными для маркеров МСК (CD73 – 98%, CD90 – 100%, CD105 – 100%) и содержали небольшую примесь гемопоэтических клеток (около 4,6% ...

Сухих Г.Т., Пекарева Е.О., Пекарев О.Г., Силачев Д.Н., Майбородин И.В., Баранов И.И., Поздняков И.М., Бушуева Н.С.