Выявление маркеров токсинов кишечных бактерий для диагностики и оценки эффективности лечения острых кишечных инфекций

Проведено клинико-лабораторное обследование 273 больных острыми кишечными инфекциями (ОКИ) различной этиологии средней тяжести течения при бактериологическом подтверждении диагноза всего в 14,7 % случаев. В копрофильтратах методом коагглютинации выявлены О-антигены S. sonnei, S. flexneri 1-6, S. dysenteriae 1, Salmonella В, С1, С2, D, E серогрупп, Y. pseudotuberculosis І и ІІІ, Y. enterocolitica О3, О7,8, О9, О4,33, О6,30, Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari), V. сholerae 01, а также маркеры Шига токсина, токсинов А и В C. difficile, энтеротоксина типа А C. perfringens, холероподобного энтеротоксина. Одновременное выявление маркеров 2–5 токсинов отмечено у 66,7 % больных (часто – сочетание энтеротоксина А C. perfringens с токсином А/В C. difficile или с Шига токсином). К моменту выписки из стационара маркеры токсинов сохранялись в кале у 12,5 % больных. Определены уровни и частота присутствия маркеров указанных токсинов в составе ЦИК сыворотки крови. При увеличении токсигенной нагрузки на организм (числа токсинов в кале) происходит снижение уровней маркеров Шига токсина и токсина А клостридий диффициле в составе ЦИК крови. При лечении ОКИ ципрофлоксацином существует тенденция к росту, а при лечении без использования ципрофлоксацина – тенденция к падению уровня маркера Шига токсина в составе циркулирующих иммунных комплексов кров (ЦИК) крови. Полное прекращение выявления в копрофильтрате О-антигенов и токсинов может служить показателем высокой эффективности проведенного лечения. С целью верификации диагноза ОКИ, выявления бактериально-бактериальных микст-инфекций и трудно диагностируемых йерсиниозов, кампилобактериозов, клостридиозов целесообразно использовать широкий спектр диагностических тест-систем для выявления маркеров экзотоксинов и специфических О-антигенов.
The authors have conducted clinical and laboratory examination of 273 patients with acute intestinal infections (AII) of different etiology with moderate course of disease, and diagnosis was bacteriologicaly confirmed in 14.7% of cases only. S. sonnei O-antigens, S. flexneri 1-6, S. dysenteriae 1, Salmonella В, С1, С2, D, E serogroups, Y. pseudotuberculosis I and III, Y. enterocolitica О3, О7,8, О9, О4,33, О6,30, Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari), V. sholerae 01, as well as markers of Shiga toxin, C. difficile toxins A and B, C. perfringens enterotoxin type A, and cholera enterotoxin were identified in coprofiltrates by coagglutination. Simultaneous identification of 2 to 5 toxin markers was observed in 66.7% of patients (often - a combination of C. perfringens enterotoxin A with C. difficile toxin A/B or Shiga toxin). By the time of discharge from the hospital markers toxins remained in the fecal masses in 12.5% of patients. Levels of markers and frequency of these toxins occurrence in the CIC of blood serum were identified. Increase of toxigenic strain (the number of toxins in the fecal masses) lead to decrease of levels of markers of Shiga toxin and the Clostridium diffitsile toxin A in the CIC of blood serum. There is a trend to increase of level of a marker of Shiga toxin in the circulating immune complexes (CIC) of blood against the background of ciprofloxacin use in the treatment of AII. In contrast, the treatment without the use of ciprofloxacin leads to decrease of level of marker of Shiga toxin. A complete cessation of identification of O-antigen and toxins in coprofiltrates can serve as indicator of high treatment efficiency. For the purpose to verify the diagnosis of AII, identification of bacterial mixed-infections and difficult diagnosable yersiniosis, campylobacteriosis, clostridiosis, the use of wide range of diagnostic test kits for detection of markers of exotoxins and specific O-antigens is reasonable.

Кишечные инфекционные заболевания имеют высокую социально-экономическую значимость и продолжают оставаться актуальной проблемой здравоохранения во всем мире в связи с высокой заболеваемостью, смертностью, трудностями диагностики, а также триггерным действием на
развитие патологических синдромов, иммунодефицитных, аллергических и аутоиммунных состояний. В структуре инфекционной патологии острые кишечные инфекции (ОКИ) занимают одно из ведущих мест [1].

Полиэтиологичность большинства ОКИ и присутствие у возбудителей широкого спектра антигенов, токсинов и ферментов обусловливают одновременное или последовательное воздействие на организм человека нескольких факторов патогенности с различными механизмами действия [2–5]. Наиболее мощным эффектом среди них обладают липополисахариды, сходные с ними по действию компоненты грамположительных возбудителей, а также экзотоксины.

Особенности воздействия возбудителей и их факторов патогенности (отдельных и в совокупности) на макроорганизм в конкретных условиях инфекционного заболевания изучены недостаточно в связи с ограниченными возможностями используемых методов, их сложностью и малой доступностью. В современных условиях все большую значимость приобретает необходимость понимания того, каким образом энтеропатогенные возбудители способны вызывать развитие заболеваний и влиять на характер клинического течения, в т. ч. микстинфекций, в условиях формирования и распространения клонов возбудителей с полирезистентностью к антимикробным препаратам, постоянного изменения этиологической структуры, роста числа смешанных бактериально-бактериальных, бактериально-вирусных инфекций и необходимости более осторожного и дифференцированного подхода к вопросам лечения и профилактики.

В связи с этим несомненный интерес представляет изучение экзотоксинов в биосредах организма больных при кишечных инфекционных заболеваниях, а именно – их присутствия, уровня и динамики, соотношений с выраженностью синдрома интоксикации, уровнями иммунных комплексов, спектром, уровнями, динамикой про- и противовоспалительных цитокинов, другими факторами клеточного, а также гуморального иммунного ответа.

Цель работы – выявление маркеров токсинов кишечных бактерий у больных ОКИ для диагностики и оценки эффективности лечения.

Материал и методыисследования

Проведено клинико-лабораторное обследование 273 больных ОКИ различной этиологии средней тяжести течения. В остром периоде заболевания бактериологическое подтверждение диагноза получено у 14,7 % пациентов: у 12,5 % обнаружены сальмонеллы, у 2,2 % – шигеллы, у остальных 85,3 % больных диагноз бактериологически не подтвердился (БПОНЭ – бактериальное пищевое отравление неустановленной этиологии). Исследования проведены в остром периоде (1–3-й дни), в динамике болезни (4–6-й дни) и в период ранней реконвалесценции (7–9-й дни).

В качестве дополнительного метода расшифровки этиологии ОКИ мы использовали реакцию коагглютинации (РКА) на стекле с набором антительных диагностикумов для выявления в качестве маркеров возбудителей О-антигенов (О-АГ) S. sonnei, S. flexneri 1–6, S. dysenteriae 1, Salmonella В, С1,
С2, D, E серогрупп, Y. pseudotuberculosis І и ІІІ, Y. enterocolitica О3, О7,8, О9, О4, 33, О6, 30, Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari), V. сholerae 01, а также РКА на планшете для выявления маркеров Шига токсина (ШТ), токсинов А и В C. difficile, энтеротоксина типа А C. perfringens, холероподобного энтеротоксина (диагностикумы были изготовлены и любезно предоставлены ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН). Выявление маркеров токсинов проведено в пробах копрофильтратов (КФ) и в составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), осажденных из сыворотки крови с использованием 5 %-ного полиэтиленгликоля 6000 [6–8].

Количественное содержание интелейкина-1β (ИЛ-1β), фактора некроза опухоли (ФНО) α, ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови определено у 180 больных в разгар заболевания иммуноферментным анализом (тест-системы ООО “Протеиновый контур” СПб.). Также проведены традиционные бак-
териологические исследования, общеклинические анализы крови и мочи, по показаниям – копрологическое и биохимические исследования, ультразвуковое исследование органов брюшной полости, гастроскопия, колоно-, ректороманоскопия и ЭКГ.

С целью оценки основных объективных симптомов интоксикации и диарейного синдрома учитывали максимальную высоту и длительность лихорадки, частоту стула и общую длительность диареи, а также количество лейкоцитов и лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) в разгар болезни (1–3-й дни).

Статистическая обработка данных была выполнена по программам Microsoft Excel и Statistica 6.0, “Biostat” для IBM PC. Использованы параметрические и непараметрические критерии-χ2 Стьюдента, корреляционный анализ.

Результаты и обсуждение

Этиологическая структура ОКИ (n = 273) подтверждена в общей сложности бактериологически и по выявлению О-АГ, а также маркеров токсинов возбудителей у 94,9 % больных: у 11,0 % выявлен О-АГ одного возбудителя либо маркер ...

Белая О.Ф., Гюлазян Н.М., Андрекайте Н.А.