Значимость иммунологических методов в оценке функциональной активности тромбоцитов у беременных с тромбоцитопенией

Цель. Изучить клиническую значимость иммунологического метода анализа функциональной активности тромбоцитов у беременных с тромбоцитопенией на фоне активации системы гемостаза.
Материалы и методы. Проведено многоцентровое проспективное исследование с включением 299 беременных женщин в III триместре беременности. Выделено 2 группы: основную (n=249) составили пациентки с тромбоцитопенией, контрольную (n=50) – женщины с нормальными показателями тромбоцитов при физиологически протекающей беременности. В исследовании мы оценили метод проточной цитофлуориметрии с использованием FITC- и PE-меченных антител к рецептору GP IIb/IIIa и Р-селектину с целью определения количества рецепторов GP IIb/IIIa и экспрессии Р-селектина на поверхности тромбоцитов и провели ассоциативную связь с принципом активации с АДФ, который используется в стандартной индуцированной агрегации.
Результаты. После активации АДФ в основной группе беременных с тромбоцитопенией отмечались более высокая степень экспрессии P-селектина (увеличение практически в 40 раз) и достоверное увеличение количества рецепторов GP IIb/IIIa на поверхности тромбоцитов по сравнению с группой контроля (p=0,0001; p=0,001). Это говорит о гиперагрегации тромбоцитов, активации системы гемостаза и доказывает целесообразность назначения препаратов ацетилсалициловой кислоты и низкомолекулярных гепаринов у данной группы пациенток с целью профилактики развития акушерских осложнений.
Заключение. Метод проточной цитометрии может быть использован в качестве нового лабораторного критерия оценки гиперагрегации тромбоцитов у беременных с тромбоцитопенией, а также обоснования назначения препаратов ацетилсалициловой кислоты и низкомолекулярных гепаринов у данной группы пациенток.

Активация тромбоцитов является не только важной составляющей физиологического функционирования системы гемостаза, ангиогенеза, реализации иммунологических реакций, но и патогенетической основой развития тромбозов, инфаркта миокарда, инсультов и других тромбоэмболических нарушений. Среднее количество тромбоцитов в крови беременных женщин составляет 213 000–250 000×109/л [1]. Тромбоцитопения характеризуется снижением количества тромбоцитов <150×109/л, является частым цитопеническим синдромом при гестации и встречается у 7–12% беременных женщин [2, 3]. До 75% тромбоцитопений патогенетически связаны с самой беременностью [4]. По некоторым данным, от 5–21% всех случаев тромбоцитопении у беременных развивается в результате активации внутрисосудистого свертывания крови на фоне гестационных осложнений, чаще всего преэклампсии [5]. Под воздействием таких факторов, как тромбин, коллаген, АДФ происходит активация тромбоцитов, которая функционально проявляется изменением формы и экспонированием вторичных рецепторов и белков клеточной поверхности тромбоцитов, ключевыми из которых являются GpIIb/IIIa и P-селектин [6]. Гетеродимер GpIIb/IIIa является наиболее многочисленным поверхностным рецептором тромбоцитов, активация которого происходит в результате передачи сигнала от рецепторов адгезии GPVI и GpIb/IX/V, рецепторов, связанных с G-белком, и рецепторов АДФ (P2Y1 и P2Y12). В процессе Сa2+-зависимой активации комплекс претерпевает ряд изменений, которые обеспечивают возможность связывания тромбоцита с фибриногеном [7–9]. Р-селектин (CD 62P) является белком клеточной поверхности и основным компонентом, который ответственен за образование тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов и экспрессируется только активированными тромбоцитами [10]. Экспрессирование Р-селектина на поверхности тромбоцитов наиболее информативно в отношении оценки функциональной активности тромбоцитов, в том числе и на фоне применения антиагрегантных препаратов. Адекватный контроль функциональной активности тромбоцитов в настоящее время является нерешенной проблемой клинической лабораторной диагностики [11], в то время как оценка агрегационной активности тромбоцитов имеет большое значение, а контролируемая противотромботическая профилактика и терапия при подтвержденной активации внутрисосудистого свертывания позволяют предупредить развитие плацента-ассоциированных осложнений беременности.

На сегодняшний день основным, часто используемым и доступным методом, позволяющим оценить активность тромбоцитов, является оптический метод оценки индуцированной агрегации тромбоцитов по степени светопропускания [12]. Метод имеет ряд недостатков: условия забора крови при данном методе и последующее центрифугирование образцов активируют тромбоциты и искажают результат; нет четких критериев по концентрации индукторов, и в полной мере метод не позволяет достоверно оценить степень гиперагрегации тромбоцитов [11, 12]. Одним из современных иммунологических методов анализа структурных компонентов клеток крови является проточная цитометрия, которая проводится с использованием антител, меченных различными флуоресцентными красителями [6, 13–17]. По сравнению с другими способами оценки функциональной активности тромбоцитов, проточная цитометрия, возможно, наиболее адекватно отражает ситуацию in vivo, так как в основе заложена высокоспецифичная реакция антиген–антитело.

Цитометрический анализ с использованием различных флуоресцентных красителей и специфичных антител позволяет оценить показатели, напрямую связанные с гиперагрегацией тромбоцитов: образование микровезикул, тромбоцитарных и тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов, экспрессирование и активацию рецепторов на поверхности тромбоцитов [12, 18, 19].

Цель исследования: изучить клиническую значимость иммунологического метода анализа функциональной активности тромбоцитов у беременных с тромбоцитопенией на фоне активации системы гемостаза.

Материалы и методы

В период с 2013–2018 гг. в ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта» и в СПб ГБУЗ «Родильный дом № 6 им. проф. В.Ф. Снегирева» было проведено проспективное исследование с включением 299 беременных женщин в III триместре беременности. Выделено 2 группы: основную (n=249) составили пациентки с тромбоцитопенией (уровень тромбоцитов <150×109/л), контрольную (n=50) – женщины с нормальными показателями тромбоцитов при физиологически протекающей беременности.

Критерии включения в основную группу: беременные с тромбоцитопенией (количество тромбоцитов менее 150×109/л) в III триместре беременности (сроком гестации 28–30 недель) в возрасте от 20 до 40 лет.

Критерии исключения из основной группы: беременные с иммунной тромбоцитопенией (идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура), с врожденной тромбоцитопенией, с наследственными и приобретенными коагулопатиями, системными аутоиммунными заболеваниями, сахарным диабетом 1 типа с генерализованными осложнениями, с тромбоцитопенией менее 50×109/л.

Критерии включения в группу контроля: беременные женщины в III триместре беременности, с нормальными показателями тромбоцитов, с физиологически протекающей беременностью.

Критерии исключения из группы контроля: беременные женщины в III триместре беременности с наличием акушерских осложнений: преэклампсия, плацентарная недостаточность, беременные с соматическими, хроническими заболеваниями.

Всем беременным женщинам, которые входили в группы исследования и находились под наблюдением, было проведено полное клинико-лабораторное и анамнестическое обследование, назначена индивидуальная терапия.

Наряду со стандартными методами обследования (клинический анализа крови с определением количества тромбоцитов, уровня гемоглобина, анализ коагулограммы) всем пациенткам, включенным в исс...

150×109/л,>

Мысик О.Л., Зайнулина М.С., Баранов В.С., Поляков А.С.