ХОНДРОСФЕРОИДЫ: СОЗДАНИЕ И ФЕНОТИПИРОВАНИЕ НА ПРИМЕРЕ ОСТЕОАРТРИТА

Актуальность. Остеоартрит (ОА) – распространенное хроническое заболевание суставов, связанное с дегенерацией хрящевой ткани и хроническим воспалением; его распространенность зависит от возраста, пола, этнической принадлежности и генетики. 2D-модели in vitro не отражают физиологию ОА: хондроциты теряют фенотип, а для индукции воспаления нужны нефизиологичные дозы агентов. 3D-культуры (в том числе сфероиды) лучше сохраняют свойства клеток, подходят для тестирования препаратов и создания тканеинженерных конструкций; 

Цель. Разработать метод формирования хондросфероидов из аутологичных хондроцитов пациентов с остеоартритом (ОА) для биопечати и моделирования ОА in vitro, оценить сохранение хондрогенного фенотипа в 3D-культуре.

Материал и методы. Хондроциты выделяли из хрящевой ткани (1,5×1,5 см²), полученной от пациентов с ОА при эндопротезировании (клиника ФГБОУ ВО БГМУ). Ткань измельчали до 1–3 мм², обрабатывали 0,2% коллагеназой II типа при 37 °C в течение ночи. Клетки культивировали в DMEM/F12 с 10% фетальной бычьей сыворотки, 2 mM L-глутамина и 1% антибиотико-антимикотика. Хондросфероиды формировали в 81-луночных агарозных молдах (агароза в DMEM/F12 без сыворотки, 1:1, с пенициллином/гентамицином 50 мкг/мл).

В лунку вносили ≥2000 клеток, культивировали 5 дней при 37 °C и 5% CO₂. Фенотип подтверждали окрашиванием на аггрекан (ACAN) и коллаген II типа (COL2A1) с визуализацией на Celena X.

Результаты. Компактизация сфероидов начиналась через 24 ч, ...

Вакилов Ф.Ф., Абдуллина Н.И., Пятницкая С.В., Акбашев В.Н., Якупов Р.Р., Тюрин А.В.