Клиническая характеристика и анализ изменения профиля аминокислот и органических кислот в динамике в моче пациентов с риском развития преэклампсии

Этиология преэклампсии (ПЭ) не выяснена до настоящего времени, но известно, что при ПЭ наблюдаются патофизиологические изменения многих метаболических путей. Изучение особенностей метаболитов мочи при ПЭ позволит определить потенциальные биомаркеры, которые могут усовершенствовать клиническую диагностику и улучшить понимание механизмов развития ПЭ. Цель: Определение характерных особенностей состава мочи в динамике у беременных с риском ПЭ и реализовавшейся ПЭ. Материалы и методы: Материалом для данного исследования была моча беременных женщин, взятая в 11–14, 22–25, 32–35 недель беременности. Пациентки были разделены на три группы: I группу составили 13 женщин с физиологической беременностью, II – 13 пациенток с высоким риском развития ПЭ, III – 5 беременных с развившейся ПЭ. В ходе исследования применялись клинико-лабораторные и инструментальные методы, в том числе расширенный комбинированный скрининг I триместра и анализ состава аминокислот и органических кислот мочи с помощью жидкостной хроматографии с масс-спектрометрической детекцией. Результаты: Диагноз ПЭ устанавливали на основе соответствующих клинических рекомендаций Минздрава России от 2021 г. В III группе женщины значимо чаще имели отягощенный акушерско- гинекологический анамнез – антенатальную гибель плода (n=2, 40%), ПЭ (n=3, 60%) – по сравнению со II группой, где лишь у 1 пациентки (7,7%) отмечалась ПЭ в анамнезе, а в группе сравнения репродуктивный анамнез отягощен не был (р<0,001). Хроническая артериальная гипертензия значимо чаще встречалась в III группе (n=4, 80%). Значимые различия динамического изменения уровней пролина, аспартата и яблочной кислоты наблюдались при сравнении групп I и III, а пролина, альфа- кетоглутарата и 3-гидрокси-3-метилглутаровой кислоты – при сравнении групп II и III. Заключение: В ходе исследования были выявлены метаболиты, уровни которых в моче статистически значимо различаются между группой пациенток с физиологическим течением беременности и группами пациенток с риском развития и развившейся ПЭ в различные сроки гестации. Профилирование метаболитов мочи потенциально может быть использовано для прогнозирования ПЭ. Вклад авторов: Ошхунова М.С., Муминова К.Т., Горина К.А. – поиск публикаций по проблеме, сбор лабораторных данных и анализ клинического материала, написание текста рукописи; Ходжаева З.С., Франкевич В.Е. – анализ результатов исследований, структурирование текста, редактирование и утверждение финальной версии рукописи; Чаговец В.В., Новоселова А.В. – выполнение лабораторных исследований, статистический анализ экспериментальных данных, написание рукописи. Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии возможных конфликтов интересов. Финансирование: Работа выполнена в рамках Государственного задания МЗ РФ № 121040600435-0 «Обоснование персонализированных подходов к антигипертензивной терапии при ГРБ и ПЭ». Одобрение Этического комитета: Исследование было одобрено локальным Этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России. Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных. Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем. Для цитирования: Ошхунова М.С., Чаговец В.В., Новоселова А.В., Муминова К.Т., Горина К.А., Ходжаева З.С., Франкевич В.Е. Клиническая характеристика и анализ изменения профиля аминокислот и органических кислот в динамике в моче пациентов с риском развития преэклампсии. Акушерство и гинекология. 2023; 8: 56-66 https://dx.doi.org/10.18565/aig.2023.48

Преэклампсия (ПЭ) – это полиэтиологичный клинический синдром, как правило, развивающийся после 20 недель беременности, специфичный для беременности и послеродового периода. ПЭ является основной причиной материнской и перинатальной заболеваемости и смертности и снижает качество последующей жизни женщины даже при благоприятном исходе родов. Частота ПЭ составляет 2–8% среди всех беременных, а 10–15% случаев материнской смертности непосредственно связано с ПЭ и эклампсией [1].

Поиски молекул-предикторов ПЭ продолжаются. Вместе с тем установлено, что в связи с гетерогенностью данного синдрома наличие единого биомаркера – предиктора, способного предсказать все виды нарушений при ПЭ, крайне сомнительно. Особый интерес исследователей в последние годы сконцентрирован на изучении постгеномных изменений, а именно особенностей метаболомного профиля. Анализ метаболома обладает потенциалом для детального исследования ПЭ и других гипертензивных нарушений, но количество таких работ ограничено. Особенно это касается исследования метаболома мочи при ПЭ, несмотря на то, что моча является удобным объектом для анализа ввиду неинвазивности забора материала. Основные работы посвящены изучению плазмы и сыворотки крови [2, 3]. Вместе с тем состав мочи отражает физиологические процессы, происходящие в организме, и может выступать в качестве информативного объекта исследований.

В данном исследовании в динамике было изучено содержание аминокислот и органических кислот в моче пациенток с риском развития ПЭ, с развившейся ПЭ и пациенток с неосложненной беременностью.

Целью исследования было определение характерных особенностей состава мочи в динамике у беременных с риском развития ПЭ и реализовавшейся ПЭ.

Такого рода анализ позволит определить потенциальные метаболические биомаркеры, которые могут усовершенствовать современные модели прогнозирования риска, клинической диагностики и улучшить понимание конкретных метаболических механизмов ПЭ.

Материалы и методы

В ходе исследования, проведенного на базе ФГБУ «НМИЦ АГП им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России, обследованы 27 пациенток, которые были разделены на 3 группы: I группа (n=13) – женщины с неосложненной беременностью; II группа (n=13) – пациентки с высоким риском, но не развившейся ПЭ, и III группа (n=5) – пациентки с высоким риском и развившейся ПЭ. Пациентки были включены в группу высокого риска развития ПЭ по результатам расширенного комбинированного скрининга I триместра со значением ≤1:100 до 34 недели и/или до 37 недель беременности. Диагноз ПЭ ставился в соответствии с клиническими рекомендациями, утвержденными Минздравом России [4].

Критерии включения в группу сравнения: возраст старше 18 лет, одноплодная спонтанная беременность, а также наличие добровольного информированного согласия. Условия для исключения беременных из исследования: многоплодная беременность, сахарный диабет, аутоиммунные заболевания, онкологические заболевания, заболевания почек в стадии декомпенсации, преждевременный разрыв плодных оболочек.

Для проведения анализа проводился забор средней порции мочи после предварительных гигиенических процедур. В процессе приготовления к анализу аминокислот к 200 мкл образца мочи добавляли 480 мкл раствора хлороформ/метанол (3/1 об./об.), перемешивали 10 минут, центрифугировали 10 минут при 13 000 G, после чего отбирали 200 мкл верхней фазы, высушивали в потоке азота и растворяли образец в 500 мкл раствора ацетонитрил/вода (1/1 об./об.).

Для анализа органических кислот к 100 мкл мочи добавляли 850 мкл метанола, перемешивали 5 минут, центрифугировали 10 минут при 13 000 G и отбирали 200 мкл в хроматографическую виалу.

Анализ образцов осуществляли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ЖХ) на хроматографе 1260 Infinity II (Agilent, США) с детектированием на масс-спектрометре (МС) 6460 Triple Quad (Agilent, США). Разделение образцов осуществлялось методом жидкостной хроматографии с использованием колонок Jasem для анализа аминокислот или органических кислот.

Для анализа аминокислот вводили 15 мкл образца и использовали следующие элюенты, подаваемые со скоростью потока 700 мкл/мин с поддерживаемой температурой колонки 30◦С, в качестве подвижной фазы: элюент А – вода с добавлением 0,1% муравьиной кислоты, элюент В – ацетонитрил с добавлением 0,1% муравьиной кислоты. Состав подвижной фазы в ходе анализа изменялся следующим образом: 0–1 минута – 78% В; до 4-й минуты объемная доля элюента B снижалась до 20%, сохраняла значение до 4,5 минуты и за 0,1 минуты возвращалась к значению 78%.

Для анализа органических кислот вводили 10 мкл образца и использовали следующие элюенты А и В от Jasem для анализа органических кислот, подаваемые со скоростью потока 500 мкл/мин с поддерживаемой температурой колонки 40°С. Состав подвижной фазы в ходе анализа изменялся следующим образом: 0–2 мин. – 5% В; до 2,1 минуты объемная доля элюента B повышалась до 35%, сохраняла значение до 4,5 минуты, повышалась до 80% за 0,1 минуты, уде...

Ошхунова М.С., Чаговец В.В., Новоселова А.В., Муминова К.Т., Горина К.А., Ходжаева З.С., Франкевич В.Е.